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原代培養(yǎng)是指由體內(nèi)取出組織或細胞進行的首-次培養(yǎng)，也叫初代培養(yǎng)，是細胞系建立的第一步。
在9月22日開播的“原代細胞常見問題解決方案"課程中，有很多老師就原代細胞培養(yǎng)問題提出了疑問。我們篩選出部分代表性問題，并作了詳細解答。
臍靜脈內(nèi)皮細胞需要包被嗎？選用什么包被比較好？
臍靜脈內(nèi)皮細胞建議包被，建議選用0.1%明膠包被，包被的細胞形態(tài)會比不包被的好看。
角質(zhì)細胞需要包被嗎？
角質(zhì)細胞生長類似上皮細胞，營養(yǎng)環(huán)境要求高，建議使用膠原蛋白包被。
細胞原皿狀態(tài)很好，傳代后細胞邊界不清楚是什么原因？感覺虛化的很快。
傳代后邊界不清晰，考慮細胞是否需要外基質(zhì)條件，嘗試包被培養(yǎng)瓶；其次考慮細胞是否老化、分化。
請問真菌污染了怎么辦？就丟了這瓶細胞嗎？
真菌污染細胞，建議丟棄，避免對其他細胞造成交叉污染，損失更大；若要挽救，建議隔離培養(yǎng)，加兩性-霉素B等抗生素，每天換液，持續(xù)清除，但只能維持幾周，后續(xù)培養(yǎng)會反復爆發(fā)，耗費成本更高。
支原體污染會改變細胞的形狀嗎？細胞里面也有很多小碎片，這該怎么辦？用抗支原體藥可以去除細胞外碎片，但是細胞里的無變化。
污染較輕的，不會影響細胞狀態(tài)，出現(xiàn)大量碎片，細胞內(nèi)部也有碎片，污染就很嚴重了，支原體清除試劑對外部清除有效，內(nèi)部較難清除；同時在細胞內(nèi)部已損傷情況下，沒有必要清除，此時細胞已經(jīng)喪失很多功能，建議廢棄。
肝細胞培養(yǎng)中包被對其影響大嗎？
肝細胞營養(yǎng)環(huán)境要求較高，建議包被，不包被影響貼壁率（低于50%），長時間培養(yǎng)不包被會導致細胞卷曲聚團，影響狀態(tài)。
原代人牙周膜細胞凍存復蘇后貼壁很少且生長很慢，怎么處理呢？
原代細胞復蘇貼壁少，生長慢，首先是調(diào)整細胞密度保持在70%以上，確保生長狀態(tài)，其次選用高質(zhì)量血清或培養(yǎng)基進行補救，也可以補加5%血清。
小鼠原代雪旺細胞傳代后不增殖怎么辦？
一般建議：
1
靜置培養(yǎng)細胞，細胞在穩(wěn)定環(huán)境下更易生長，一般3-5天可有變化；
2
調(diào)整細胞密度，控制在70%-80%，更利于細胞生長；
3
補加適量血清促進細胞增殖，或更換質(zhì)量更高的血清，提高營養(yǎng)因子促進細胞生長。雪旺細胞分離初期1-2周是處于停止增殖狀態(tài)的，度過該時期才會增殖。
原代細胞的紅細胞較多怎么辦？需要紅細胞裂解液嗎？
分離初期紅細胞較多，可用淋巴細胞分離液或Percoll分離液分離，也可用裂解液處理。
原代分離肺動脈平滑肌細胞，酶消化法和貼壁法，哪個更好呢？
貼壁法細胞爬出慢，周期長，成功率不高耗費時間，得到的細胞活性相對高；消化法，速度快，數(shù)量多，剛分離的活性差一點，后期培養(yǎng)要適應，看自主需求選擇。
干細胞傳代次數(shù)有限制嗎？
理論上無傳代次數(shù)限制，實際培養(yǎng)中，受離體培養(yǎng)環(huán)境變化、血清質(zhì)量、培養(yǎng)基質(zhì)量、傳代損傷等外部培養(yǎng)環(huán)境影響，細胞超過10代以上會出現(xiàn)分化、不增殖、老化凋亡等問題，所以常規(guī)建議10代以內(nèi)使用。
我們?nèi)〉墓趋兰⌒l(wèi)星細胞，在大皿養(yǎng)沒事，一換液就漂，是啥原因？
骨骼肌衛(wèi)星細胞，本身貼壁性不強，易漂浮，特別是局部密度大會導致細胞聚集成束，最后分化形成肌管束，建議培養(yǎng)中均勻接種，包被增強吸附性，控制密度在70-80%。
脂肪細胞原代培養(yǎng)分離細胞時，沒有細胞怎么辦？
脂肪細胞原代培養(yǎng)沒分出細胞，一是要檢查分離方法是否正確，中間每一步操作最好進行鏡檢，可以找出是哪一步損失細胞的，二是考慮后面離心步驟是否損失細胞，細胞包含脂滴，密度較小，漂浮丟棄了也有可能。
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